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淺談微生物檢測中的分子生物學(xué)

發(fā)布時間: 2020-01-17

俗語說:“外行看熱鬧,內(nèi)行看門道”。咱們大部分人在談及分子生物學(xué)這五個大字的時候,都會覺得高深莫測,深奧難懂,其實這種神秘只是針對科研領(lǐng)域而言,對于我們微生物檢測領(lǐng)域,倒沒有多少值得我們仰止的東西。今天,就讓小王帶你揭開這層神秘的暗紗!

分子生物學(xué)是近代的產(chǎn)物,自1953年,沃森和克里克提出DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型,標(biāo)志著分子生物學(xué)誕生。因為分子生物學(xué)大多數(shù)是在DNA層面上展開研究的,那咱就先說下DNA:


淺談微生物檢測中的分子生物學(xué)

上圖就是DNA的照片,當(dāng)然,這是模擬的,里面的球球(核糖)和棍棍(堿基,PCR中的原料)就是組成DNA的材料。它的大名就叫做:脫氧核糖核酸!而DNA就是決定生物表型的內(nèi)在因素,比如大家熟知的同卵雙胞胎,就是因為DNA高度相似,這也是當(dāng)下親子鑒定運用的主要依據(jù)。

又要有人問小王了,你一直在說DNA,那基因又是啥呢,DNA和基因是一回事兒不?

?通俗的講,DNA上包含很多基因,而基因只是DNA中的一個有效片段。就好比DNA是一條馬路,而基因則是這條馬路上的一個又一個站點。而生物的表型也是通過基因的形式來表現(xiàn)的。就像上面提到的同卵雙胞胎,也不是完全一樣,不一樣的地方就是因為相關(guān)的基因不一樣。


因此,大家可以看出,基因是代表一個物種所獨有的物質(zhì),是特異性的,單獨存在的,所以,基因?qū)用娴姆治鲆餐脕韺ξ粗奈锓N進(jìn)行鑒定,特別是咱們微生物檢測領(lǐng)域,每個菌株的種屬間都有其特殊存在的基因,而我們只需要看未知菌株是否含有某個基因,就可以確定其是否為該菌屬。比如,新修訂的《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗》中就推出了PCR的方法,運用PCR技術(shù)對可疑菌進(jìn)行鑒定,看其是否含有致瀉大腸埃希氏菌的毒力基因,又是屬于哪種毒力基因來進(jìn)行鑒定。


淺談微生物檢測中的分子生物學(xué)


大家又要問小王了,什么是PCR呢?

PCR從定義上是叫做聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),其實也可以認(rèn)定為是一種生化反應(yīng)過程,是指在特定的條件下,運用聚合酶合成DNA的一種手段。那為什么要用PCR呢?下面就給大家舉個例子就知道了:

在樣品檢測中我們往往要進(jìn)行增菌,增菌的目的一是為了富集,便于檢測,二就是微生物太小,我們?nèi)庋凼强床坏降?,而增菌后就方便用肉眼觀察。劃平板劃出單菌落也是同樣的道理。而DNA更是微小不可見,運用PCR技術(shù)擴(kuò)增后就可以用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)讓肉眼可以觀察到,也方便鑒定。


淺談微生物檢測中的分子生物學(xué)


而在我們?nèi)粘1O(jiān)測工作中經(jīng)常還會用到比普通PCR更進(jìn)一步的方法:熒光定量PCR。從原理上講,普通PCR和熒光定量PCR在微生物檢測中檢測的基因是一致的,只是采用的方法不一樣。二者的區(qū)別在于,普通PCR需要借助凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察,而熒光定量PCR可以通過儀器連接的電腦直接觀察擴(kuò)增曲線。相對來講,熒光PCR的操作更方便簡單些,但設(shè)備費用較高,而普通PCR需要擴(kuò)增和電泳后染色,才能借助成像系統(tǒng)觀察,較為麻煩。

不論是普通PCR和熒光PCR,在其反應(yīng)過程中,聚合酶的作用至關(guān)重要,其常規(guī)保存于-20℃,這就給成品試劑盒的運輸帶來了麻煩,必須干冰運輸才能保證試劑盒的效果。

而北京陸橋的MX系列PCR產(chǎn)品,采用國際上先進(jìn)的凍干預(yù)混技術(shù),將聚合酶和其他反應(yīng)物質(zhì)預(yù)先凍干于反應(yīng)管內(nèi),大大改善了產(chǎn)品的穩(wěn)定性,也使得冷藏甚至常溫運輸變成了可能。又由于是預(yù)混液凍干,兩步操作即可上機,避免了人員在微量加液過程中的誤差,使我們的檢測過程更加穩(wěn)定可靠!


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